關(guān)于液氮研磨的步驟分析

　　液氮研磨原理：分子生物學(xué)是當(dāng)前生命科學(xué)領(lǐng)域的前沿學(xué)科，其理論與技術(shù)已滲透到各學(xué)科領(lǐng)域，而分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)在生命科學(xué)研究中顯得相當(dāng)重要。在實(shí)際工作中，許多實(shí)驗(yàn)材料比如動(dòng)物身上的肌肉組織、結(jié)締組織、骨組織、毛發(fā)組織等，植物的根、莖、葉、種子等均需磨碎,隨后才能對(duì)其成分、基因與蛋白質(zhì)及結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行研究。
 

　　液氮研磨在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用廣泛，特別是有關(guān)核糖核酸(RNA)、脫氧核糖核酸(DNA)的分離。液氮的溫度為一196℃，它既能使各種組織成分不易被破壞或降解，又能使組織變硬，脆性增加易于磨碎。正是由于液氮的溫度極低,操作時(shí)要特別小心。
 

　　液氮研磨步驟：
 

　　1、將研缽從烘箱內(nèi)拿出，用專用容器盛一些液氮備用；
 

　　2、將液氮小心加入并浸滿研缽，浸泡預(yù)冷研杵與研缽(加入液氮時(shí)，緩慢加入，防止液氮飛濺)；
 

　　3、當(dāng)?shù)谝淮渭尤氲囊旱獡]發(fā)*后，立即向研缽中緩慢加入約1/2研缽體積的液氮(若組織塊較大或較多的情況下可浸滿研缽)，將組織迅速轉(zhuǎn)移至液氮內(nèi)，確保組織全部浸沒在液氮中；
 

　　4、使用研杵在液氮中輕輕敲打組織，將組織打碎成小塊，要注意切勿用力過度，要防止組織塊飛濺出研缽；在液氮即將揮發(fā)完時(shí)，使用研杵對(duì)組織樣本進(jìn)行碾壓研磨(注意，若為植物樣本可直接用研杵碾壓組織)；
 

　　5、待液氮揮發(fā)完后，立即加入1/3研缽體積的液氮(注意，加入液氮速度要緩慢，切勿使得液氮沖擊力過大，將組織樣本沖出研缽)，迅速用研杵研磨組織，根據(jù)組織狀態(tài)的變化程度，在確保組織始終處于冰凍狀態(tài)下，及時(shí)補(bǔ)充液氮進(jìn)行研磨，(一般30s~1min補(bǔ)充一次，至少需要補(bǔ)充3次以上)，直至組織被研磨成粉末狀。
 

　　6、當(dāng)組織研磨成粉末狀后立即加入合適體積的裂解液進(jìn)行組織裂解，若裂解液凍于研缽內(nèi)壁，用研杵輕輕敲擊下來，繼續(xù)研磨讓組織粉末與裂解液充分混合，研磨成糊狀后進(jìn)行下一個(gè)樣本的取樣操作；
 

　　7、靜置至樣本和裂解液混合物融化，將已經(jīng)融化成液體狀態(tài)的樣本轉(zhuǎn)移至離心管中，插入冰塊上暫存。